ICS 67.050 X 04 GR 中华人民共和国国家标准 GB/T22956—2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of praziquantel residue in fugu,eel and baked eel- LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22956—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：林峰、李志勇、吴映璇、欧阳少伦、林海丹、邵琳智、庞国芳 GB/T22956—2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮 残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的测定。 本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中吡喹酮残留量的检出限为5ug/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1- 2004,ISO 5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2一2004ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987，MOD） 3原理 采用乙酸乙酯提取样品中的吡喹酮残留，提取液经碱性氧化铝小柱净化，样品溶液供液相色谱-串 联质谱仪检测，外标峰面积法定量。 4试剂和材料 除特别规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙酸乙酯。 4.4冰乙酸。 4.5 0.1%乙酸溶液：准确移取1.0mL冰乙酸（4.4)至1L容量瓶中，加水至刻度，摇匀备用。 4.6 碱性氧化铝柱或性能相当者：1g，6mL。 4.7标准品：吡喹酮（praziquantel，CAS：55268-74-1），纯度≥98%。 4.8100mg/L标准储备液：准确称取吡喹酮标准品10.0mg（准确至0.01mg），用甲醇溶解并定容至 100mL。该标准储备液避光置于一18℃冰箱中保存。 4.9标准工作液：根据需要，吸取一定量的100mg/L吡喹酮标准储备液（4.8）用乙睛-水（2+3）溶液 稀释成适当浓度的标准工作液，使用前配制 4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的标准工作液（4.9），用空白样品提取液配制成 不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。 4.11滤膜：0.2μm 1 GB/T22956—2008 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾（ESI)源。 5.2离心机：转速大于或等于4000r/min。 5.3组织捣碎机。 5.5 液体混合器。 5.6 超声波水浴。 5.7 固相萃取装置。 5.8 旋转蒸发仪。 5. 9 天平：感量分别为0.01mg和0.01g。 6样品制备与保存 取样品中有代表性的可食部分约500g，用组织捣碎机粉碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标 识，于一18℃冰箱内保存。 制样操作过程中应防正样品受到污染或发生残留物含量的变化 7测定步骤 7.1提取 均质30s，4000r/min离心5min，上清液转移至25mL比色管中；另取一50mL离心管加入10mL乙 酸乙酯，洗涤匀浆刀头10S，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混合器上涡旋 混合2min，4000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管，用乙酸乙酯定容至25.0mL，摇匀备 用。 7.2净化 准确移取2.50mL样品提取液至蒸发瓶中，在40℃下旋转蒸发至干，用2mL甲醇溶解，液体混匀 器上混旋2min，置超声波水浴中超声5min，该样液全部转移至碱性氧化铝净化柱（4.6）上，控制流速 在1mL/min～2mL/min，用2mL甲醇淋洗净化柱，收集全部流出液并定量转移至浓缩瓶中，40℃下 真空旋转蒸发至干，用1.00mL乙溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡1min，加人1.00mL水，置 超声波水浴中超声振荡1min，0.2μm滤膜（4.11)过滤，供液相色谱-串联质谱测定。 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 色谱柱：IntersilCs，5μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者； b) 柱温：40℃； c) 流动相：乙腈-0.1%乙酸（4+6）； d) 流速：0.30mL/min； e) 进样量：10μL。 7. 3.2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测模式（MRM）； (P 监测离子对、定量离子对见表1； 2 GB/T22956—2008 表 1 吡喹酮的监测离子对和定量离子对 监测离子对(m/α) 定量离子对（m/2） 313/203,313/83 313/203 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体：使用前应调节各气体流量 e) 以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度， 参考质谱参数见表2。 表 2 2参考质谱参数 质谱参数 参数值 雾化气/kPa 448.2 气帘气/kPa 137.9 辅助加热气/kPa 517.1 碰撞气 中等 辅助加热气温度/℃ 500 喷雾电压/V 5000 去集电压/V 70 碰撞能/V 23(m/z313/203),40(m/z313/83) 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶 液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品谱图中被测组分监测离子的相对离子丰度与浓度接近 的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为 样品中存在对应的待测物。 表3 3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 K>50 20<K<50 10<K<20 相对离子丰度K K≤10 允许的最大偏差 ±20 ±25 ± 30 ±50 7.3.3.2定量测定 在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液（4.10）进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准 工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响 应值均应在仪器测定的线性范围内。吡喹酮标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图参见附录A中的 图A.1。吡喹酮的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1。 7.4平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.5空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定结果按式（1)计算： 1000 A X=cX .(1) 1000 3