ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准 GB/T22942—2008 蜂蜜中头孢唑嘛、头孢匹林、头孢氨苄、 头孢洛宁、头孢喹残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of cefazolin,cephapirin,cephalexin,cefalonium, cefquinome residues in honey-LC-MS-MS method 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22942—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 本标准主要起草人：李学民、母健、曹彦忠、刘晓茂、姜宁、庞国芳。 GB/T22942—2008 蜂蜜中头孢唑嘛琳、头孢匹林、头孢氨芋、 头孢洛宁、头孢喹残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了蜂蜜中头抱唑啉、头孢匹林、头孢氨芋、头抱落洛宁、头抱喹残留量的液相色谱-串联 质谱测定方法。 本标准适用于蜂蜜中头抱唑琳、头抱匹林、头孢氨芋、头抱洛宁，头抱残留量的测定。 本标准的方法检出限：头孢唑啉为10μg/kg；头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹为 2. 0 μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1一 2004,ISO 5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2一2004，ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD） 3原理 试样中五种头孢菌素类药物残留，用磷酸二氢钠缓冲溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质 谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 4.1水:GB/T6682，一级。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙睛：色谱纯。 4.4磷酸二氢钠（NaH,PO,）。 4.5氢氧化钠。 4.6乙酸。 4.75mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠（4.5），用水溶解，定容至100mL。 4.80.15mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液：称取18.0g磷酸二氢钠（4.4），用水溶解，定容至1000mL， 然后用氢氧化钠溶液（4.7）调节至pH=8.5。 头孢洛宁（CAS：5575-21-3）、头孢喹（CAS：118443-89-3），纯度≥99%。 4.101.0mg/mL五种头孢菌素标准储备溶液：准确称取每种标准物质（4.9），分别用水配制成浓度为 1 GB/T22942—2008 1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在一18℃冰柜中。 4.11五种头孢菌素标准混合工作溶液：根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储备溶液（4.10），用空 白样品提取液制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。 5mL水（4.1)和10mL磷酸二氢钠缓冲溶液（4.8）预处理，保持柱体湿润 4.13滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。 5.2 2分析天平：感量0.1 mg、0.01g。 5.3 固相萃取真空装置。 5.4贮液器：50mL。 5.5 微量注射器：25uL，100μL。 5.6 刻度样品管：5mL，精度为0.1mL。 氮气浓缩仪。 5.7 6试样制备与保存 6.1试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶 中，密封，并做上标记。 6.2试样的保存 将试样于常温下保存。 7测定步骤 7.1试样溶液的制备 称取5g试样（精确到0.01g）置于150mL三角瓶中，加入25mL磷酸二氢钠缓冲溶液（4.8），溶 （4.12）的贮液器中，以3mL/min的流速通过固相萃取柱，先用5mL磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤三角瓶 并过柱，再用2mL水洗柱，弃去全部流出液。用2mL乙睛洗脱，收集洗脱液于刻度样品管（5.6）中，在 40C氮气吹干，用2mL水溶解残渣，摇匀后，过0.2um滤膜（4.13），供液相色谱-串联质谱仪测定。按 照上述操作步骤制备空白样品提取液。 7.2测定条件 7.2. 1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：ZORBAXSB-C18，3.5μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者； b) 流动相梯度程序及流速见表1； c) 柱温：30℃； 进样量：20μL。 表1流动相梯度程序及流速 时间/min 流速/（μL/min） 水（含0.1%乙酸）/% 乙腈/% 0.00 200 95.0 5.0 2.00 200 95.0 5.0 2 GB/T22942—2008 表1(续) 时间/min 流速/（μL/min） 水（含0.1%乙酸)/% 乙腈/% 2.01 200 40.0 60.0 8. 00 200 40.0 60. 0 8.01 200 95.0 5. 0 15. 00 200 95.0 5.0 7.2. 2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.055MPa； f) 气帘气压力：0.079MPa； g) 辅助气流速：6L/min； h) 离子源温度：400℃； i) 定性离子对、定量离子对和碰撞气能量（CE）、去簇电压（DP）见表2。 表2五种头孢菌素的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量、去簇电压 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/ 去簇电压/ 化合物中文名称 化合物英文名称 V V (m/2) (m/z) 456/324 17 头孢唑啉 cefazolin 456/324 50 456/156 24 424/292 23 头孢匹林 cephapirin 424/292 45 424/152 34 348/158 14 头孢氨苄 cephalexin 348/158 40 348/174 22 459/152 29 头孢洛宁 cefalonium 459/152 35 459/123 18 529/134 21 头孢喹 cefquinome 529/134 49 529/396 19 7.3 3液相色谱-串联质谱测定 7.3.1定性测定 间与基质标准溶液中对应物质的保留时间偏差在土2.5%之内；样品谱图中各定性离子相对丰度与浓度 接近的基质标准溶液的谱图中离子相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在 对应的待测物。 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度K K>50 20<K<50 10<K<20 K≤10 允许的最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 3