ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准 GB/T22953—2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、 多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量 的测定液相色谱-串联质谱法 Determination of ivermectin,abamectin,doramectin and eprinomectin residues in fugu,eel and baked eelLC-MS-MS method 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22953—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：林峰、吴映璇、姚仰勋、欧阳少伦、林海丹、庞国芳。 GB/T22953—2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、 多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量 的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中阿维菌素类药物伊维菌素（ivermectin）、阿维菌素（abamec- tin）多拉菌素（doramectin）和乙酰氨基阿维菌素（eprinomectin）残留量的液相色谱-串联质谱测定 方法。 本标准适用于河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残 留量的测定。 本标准的方法检出限：河豚鱼肌肉、鳗鱼肌肉、烤鳗中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿 维菌素均为5μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987.MOD） 3原理 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙睛提取 后，正已烷脱脂，中性氧化铝柱净化。样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量 4试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2甲醇。 4.3正已烷，使用前以乙睛饱和。 4.4中性氧化铝：活度I级。 4.5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。 4.6中性氧化铝净化柱：取一空的固相萃取柱管，下部填入少量脱脂棉，装入2g中性氧化铝（4.4），上 部再填充4g无水硫酸钠，使用前装填 4.7伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准物质：纯度≥99%。 4.8100μg/mL标准储备液：准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标 准品（精确至0.1mg），用乙分别配制成100μg/mL的标准备液，一18℃储存。 1 GB/T229532008 4.90.500μg/mL混合标准工作液：准确吸取0.500mL伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿 维菌素标准储备液（4.8）至100mL容量瓶中，以乙睛稀释并定容，此混合工作液的浓度为0.500μg/mL。 一20℃储存。 4.10基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准工作液（4.9），用空白样品提取液配 制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。 4.11滤膜：0.2μm。 5仪器和设备 5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾电离源。 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3组织捣碎机。 5.4勾浆机：转速大于或等于8000r/min。 5.5离心机：转速大于4000r/min。 5. 6 超声波水浴。 5.7 液体混匀器。 5. 8 固相萃取装置。 5.9氮吹仪。 6试样的制备与保存 取样品约500g用组织捣碎机捣碎，装人洁净容器作为试样，密封，并标明标记，于一18C冰箱中 保存。 制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化 7测定步骤 7.1提取 准确称取2g组织样品（准确至0.01g）至50mL离心管中，加人8mL乙睛（4.1），匀浆机上 8000r/min均质20s，4000r/min离心5min，上清液转移至50mL离心管中；另取一50mL离心管加 入8mL乙睛，洗涤匀浆刀头10S，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器 上振荡30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL离心管，离心管中的沉淀再加入6mL乙睛， 用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混匀器上振荡30s，4000r/min离心5min，上清液合并至50mL离 心管中，乙睛定容至25.0mL刻度，混匀备用。 7.2净化 向上述装有样品提取液的50mL离心管中加人10ml乙饱和的正已烷（4.3）脱脂，涡旋振荡 1min，4000r/min离心5min，弃去上层正已烷，重复此操作一次，下层乙睛溶液待用。 将中性氧化铝净化柱（4.6）安置在固相萃取装置上，准确移取10.0mL已脱脂的样品提取液至中 性氧化铝净化柱中，控制流速在1mL/min～2mL/min，用2mL×2乙睛淋洗净化柱，收集全部流出 液，流出液转移至吹氮管中，50℃下氮气吹至干，用1.00mL乙溶解残渣，并置超声波水浴中超声振 荡10min，0.2μm滤膜（4.11)过滤，供液相色谱-串联质谱测定。 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：IntersilC8-3柱，5μm，150mm×4.6mm（内径）或相当者； b）柱温：40℃； c） 进样量：25μL； 2 GB/T22953—2008 (P 流速：0.8mL/min; (a 流动相：甲醇十水，梯度洗脱，见表1。 表1梯度洗脱程序 时间/min 甲醇/% 水/% 0.00 75 25 3.00 100 0 10.00 100 0 10.01 75 25 15.00 75 25 7.3.2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾电离源（ESI)； b) 扫描方式：负离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d) 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵 敏度； 监测离子对和相应的参考质谱参数，见表2。 e) 表2伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的监测离子对和相应的参考质谱参数 定性离子对 定量离子对 采集时间/ 去簇电压/ 碰撞能量/ 化合物名称 (m/2) (m/2) V ms V 873.7/567.8 -37 伊维菌素 873.7/229.2 100 75 873.7/229.2 -50 871.7/565.2 -40 阿维菌素 871.7/565.2 100 -80 871.7/229.3 -54 897.6/591.4 88- 多拉菌素 897.6/591.2 100 70 897.6/229.0 51 912.5/270.0 -49 乙酰氨基阿维菌素 912.5/565.4 100 82 912.5/565.4 37 7.3.3液相色谱-串联质谱测定 7.3.3.1定性测定 每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间 与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内：且样品谱图中各组分定性离子的相对离子丰度与浓 度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可 判定为样品中存在对应的待测物 表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度K K>50 20<K<50 10<K<20 K≤10 允许最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.3.3.2定量测定 外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样（4.10），以峰面积为纵坐标，基 3