ICS 67.120 X 04 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 21322—2007 动物源食品中3-甲基喹喔啉-2-羧酸 残留的测定 高效液相色谱法 Determination of 3-methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid residues in animal origin foodHigh performance liquid chromatography method 2007-10-29发布 2008-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21322—2007 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：华中农业大学、中国检验检疫科学研究院。 戴梦红。 GB/T21322—2007 动物源食品中3-甲基喹喔嘛-2-羧酸 残留的测定，高效液相色谱法 1范围 本标准规定了猪、鸡、鱼可食性组织中3-甲基喹喔啉-2-羧酸（3-methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid,MQCA)残留检测的制样和高效液相色谱的测定方法。 本标准适用于猪、鸡肌肉、肝脏和鱼肌肉中MQCA残留的定量检测 2规范性引用文件 SZAG 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准， GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992，neqISO3696：1987） 3原理 肌肉或肝脏组织样在酸性溶液中水解，然后经乙酸乙酯提取，磷酸盐缓冲溶液反萃取，用混合阴离 子SPE柱净化后，高效液相色谱法（紫外检测器）测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙睛：色谱纯。 4.2乙酸乙酯。 4.3偏磷酸：优级纯。 4.4磷酸：优级纯。 4.5甲酸：优级纯。 4.6磷酸氢二钾。 4.7偏磷酸甲醇溶液：准确称取偏磷酸50.0g，加入水，加热至溶解，冷却后加入甲醇200mL，加水定 容至1000mL，混匀，常温保存，有效期1个月。 4.8氢氧化钠溶液（0.05mol/L）：准确称取氢氧化钠0.5g，用蒸馏水溶解，冷却后定容至250mL，常 温保存，有效期3个月。 4.9甲酸-甲醇溶液：准确量取甲酸1mL于50mL容量瓶中，加甲醇，稀释并定容至50mL，混匀，现 配现用。 磷酸调pH值至7.0,加水定容至1000mL，常温保存，有效期1个月。 4.11标准品：3-甲基喹喔-2-羧酸，含量高于98%。 4.12标准贮备液：准确称取MQCA10.0mg，用甲醇配成浓度为1.0mg/mL的标准贮备液，4℃避光 保存，有效期6个月。 4.13固相萃取小柱MAX柱（混合阴离子交换柱）：规格60mg，3mL。 1 GB/T213222007 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。 5. 2 高速离心机。 5. 3 高速组织捣碎机。 5.4 涡旋混合器。 5.5 真空泵。 5.6 固相萃取装置。 5.7 移液器:1mL~5mL,100μL~1000μL。 5.8 pH计。 6 5试样制备与保存 6.1 试样的制备 取新鲜猪或鸡的肌肉、肝脏或鱼肌肉组织，绞碎并均质。 6.2试样的保存 一20℃以下贮存。 注：在制样的操作过程中，应防止样品污染或残留物含量发生变化。 7样品处理 7.1提取 准确称取新鲜或解冻后的试样5.00g置于离心管中，加偏磷酸甲醇溶液8mL，旋涡混合2min， 6000r/min离心15min，取出上清液，在残渣中再加入偏磷酸甲醇溶液8mL重复提取一次，合并2次 上清液。于上清液中加乙酸乙酯8mL，旋涡混合1min，4000r/min离心10min，取有机相层，再加乙 酸乙酯8mL重复提取，合并2次有机相。有机相中，加磷酸盐缓冲液6mL，旋涡混和1min，放置 10min，收集下层水相，另用磷酸盐缓冲液6mL再反萃取有机相一次，合并2次水相待净化 7.2净化 MAX柱依次用甲醇3mL、水3mL活化，加7.1样品提取液至MAX柱中，控制流速小于 1mL/min，先后用0.05mol/L氢氧化钠溶液3mL、甲醇3mL淋洗，抽干，2%甲酸-甲醇溶液3mL洗 脱，40℃以下氮吹至近干，加甲醇0.5mL溶解残渣，旋涡混匀，待测。 7.3测定 7.3.1液相色谱条件 色谱柱：Cis，250mm×4.6mm（内径），粒径5μm，或相当者； 流动相：1%甲酸水溶液+乙（80+20）； 流速：1.0mL/min； 紫外检测器波长：320nm； 进样量：20μL； 柱温：30℃。 7.3.2液相色谱测定 取试样溶液和标准工作液，作单点或多点校准，以色谱峰面积定量，标准工作液及试样液中的 MQCA响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，MQCA保留时间在9.0min左右， 标准溶液和试样溶液的液相色谱图参见附录A。 7.4标准曲线的制备 准备移取MQCA标准贮备液适量，用甲醇依次稀释成浓度分别为25μg/L、50uμg/L、100μg/L、 2 GB/T21322—2007 250μg/L、500μg/L、1000ug/L的标准工作液。每个浓度重复3次，将测得的峰面积与相对应浓度绘 制标准曲线，拟合，求回归方程和相关系数。 7.5空白实验 对于除不添加标准品工作液外的阴性样品采用完全相同的步骤进行操作。 8 结果计算 残留量按式（1)进行计算： ...(1) m 54式中： X—试样中分析物的含量，单位为微克每千克（μg/kg)； R——样液中的分析物与内标物峰面积比值； 混合基质标准溶液中分析物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V—样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 试样的质量，单位为克（g）。 m 注：计算结果需将空白值扣除 测定低限（LOQ) 9 在猪、鸡、鱼肌肉中的测定低限均为4μg/kg；猪、鸡肝脏中的测定低限均为10μg/kg。 10 回收率和精密度 参见表 B. 1~表B. 6。 3