ICS 11. 020 05 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T26352—2010 抗药性检测方法 德国小生物测定法 Test methods of cockroach resistance to insecticidesThe bioassay methods for Blattella germanica 2011-01-14发布 2011-05-01实施 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T26352—2010 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位：北京市疾病预防控制中心、中国农业大学、中国人民解放军军事医学科学院微生 物流行病研究所。 本标准主要起草人：曾晓芃、马彦、高希武、钱坤、薛素琴、颖、董言德 1 GB/T26352—2010 董抗药性检测方法 德国小生物测定法 1范围 本标准规定了德国小（Blattellagermanica）对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药 剂抗药性的诊断剂量法和敏感基线法。 本标准适用于德国小抗药性的生物测定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 诊断剂量 diagnostic dose 2. 2 F1 代 F1generation 从现场捕捉的德国小，繁殖后得到的第一代。 3试虫 现场采集德国小，室内饲养，F1代羽化后7d～15d的雄性成虫。 4试剂 内酮或其他有机溶剂，CO或乙醚，杀虫剂原药 5 仪器 养虫缸，500mL的锥形瓶，微量点滴器或微量进样器。 6 测试条件 温度：25℃±1℃，相对湿度：50%~80%。 7敏感基线法 7.1原理 依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程，以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线 1 GB/T26352—2010 作为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比，来确定待测种群的抗性水 平。具体是比较两条毒力回归线的6值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。 7.2操作步骤 7.2.1药膜法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释至一个系列浓度，通过预实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于 20%，最高浓度时大于80%。取不同浓度药剂溶液2.5mL加于500mL锥形瓶中，不断转动锥形瓶， 纱布封口。每个浓度试验重复3次，以相应溶剂处理为对照组。24h后记录死亡数。 7.2.2点滴法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释至一个系列浓度，通过预实验确定药剂的浓度系列范围，最低浓度时死亡率小于 20%，最高浓度时天于80%。试虫用二氧化碳或乙醚麻醉，用微量点滴器将1L杀虫剂药液点滴于雄 性成虫第2、3对足基节间的胸部腹板上，以点滴相应溶剂为对照组。每个浓度试验重复3次。将处理 后的试虫转人清洁容器内，供给水和食物。24h后记录死亡数。 7.3死亡判断 试虫不能正常爬行或完全不动视为死亡。 7.4结果表述 结果用抗性倍数表述，抗性倍数=待测种群LCso（LDso）值/敏感种群LCso（LDso）值 7.5判别标准 敏感品系和测定样本95%置信限不重叠，且抗性倍数大于等于5倍为抗性种群。 8诊断剂量法 8.1原理 依据药剂对敏感品系的毒力回归线，确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。 一般用2倍敏感品系的LDsg（LC9）值作为诊断剂量。根据待检测德国小种群在诊断剂量下的死亡 率做为抗性判定标准。 8.2操作步骤 8.2.1药膜法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释到一定的浓度，取2.5mL溶液加于500mL锥形瓶中（锥形瓶内表面药膜的最终 剂量达到诊断剂量，常见杀虫药剂对敏感德国小品系的诊断剂量参见表A.1），不断转动锥形瓶，使药 液均匀分布于瓶内壁，置于通风橱中过夜，使有机溶剂全部挥发。然后每瓶放试虫10头，用纱网或纱布 封口。试验重复10次，以相应溶剂处理为对照组。24h后记录死亡数。 2 GB/T 26352—2010 8.2.2点滴法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释到诊断剂量需要的浓度（常见杀虫药剂对敏感德国小品系的诊断剂量参见 表A.1)。试虫用二氧化碳或乙醚麻醉，用微量点滴器将1μL杀虫剂药液点滴于雄性成虫第2、3对足 基节间的胸部腹板上，以点滴相应溶剂为对照组。每次测定至少处理100头试虫。将处理后的试虫转 入清洁容器内，供给水和食物。24h后记录死亡数。 8.3死亡判断 试虫不能正常爬行或完全不动视为死亡。 8.4结果表述 结果用死亡率表述，计算见公式（1）。 Nm M : X100% (1) N 式中： M 死亡率； Nm——死亡虫数； N试虫总数。 对照死亡率小于5%无需校正；对照死亡率在5%～20%之间，用Abbott公式进行校正；对照死亡 率大于20%为无效测定。 依据Abbott公式校正死亡率，计算见公式（2）。 M.= .(2) 1-M. 式中： 校正死亡率； M 一处理组死亡率； M。一对照组死亡率。 8.5判别标准 校正死亡率小于80%为抗性种群。 SZIC