ICS 71.100.70 Y 42 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 27577—2011 化妆品中维生素B5（泛酸）及维生素原B5 D-泛醇）的测定 高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法 Determination of vitamin B, (pantothenic acid) and provitamin B, (D-fantothenol) in cosmeticsHPLC/UV and HPLC MS/MS 2011-12-05发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 27577—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所（国家日化产品质量监督检验中心）、上海市日用化学 工业研究所（国家香料香精化妆品质量监督检验中心）、大连标准检测技术研究中心。 本标准主要起草人：毛希琴、胡侠、潘炜、郑顺利、李鹏、李琼。 I GB/T 27577—2011 化妆品中维生素B5（泛酸）及维生素原B5 (D-泛醇）的测定高效液相色谱紫外 检测法和高效液相色谱串联质谱法 1范围 和高效液相色谱串联质谱法两种方法。 测法对泛酸、D-泛醇的检出限为30μg/g，定量限为100ug/g。高效液相色谱串联质谱法对泛酸、D-泛 醇的检出限为30ng/g；定量限为100ng/g。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度） 第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 在水和与水不互溶的有机溶剂（如三氯甲烷或异辛烷等）形成的双液相体系中，维生素B（泛酸及 其盐类（如泛酸钠及泛酸钙））和维生素原B（D-泛醇）均分布于水相，化妆品中油溶性成分易溶于有机 相，而化妆品中的表面活性剂则富集于油水界面处。利用双液相体系可将维生素B，和维生素原B，与 化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离，亚铁氰化钾-醋酸锌共沉淀剂去除提取液中的大分子基 质。在酸性条件下将泛酸和D-泛醇富集于固相萃取C18固定相上，脱除其他水溶性干扰物后，用40%甲 醇水溶液洗脱，用反相高效液相色谱分离，紫外检测器或串联四级杆质谱检测，标准曲线外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所用水为GB/T6682中规定的一级水。 4.1标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度见表1。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3甲醇：分析纯。 4.4甲酸：分析纯。 4.5甲酸：色谱纯。 1 GB/T 27577—2011 表1# 标准物质英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度 化合物 相对分子 英文名称 CAS号 分子式 分子结构式 纯度 名称 质量 HU 泛酸 pantothenic acid 79-83-4 C, Hi, NOs 219.23 H OH 泛酸钠 sodium pantothenate 867-81-2 C, Hi, NNaO, 241.22 HO" EN-0 %66< 泛酸钙 calcium pantothenate 137-08-6 C18 Ha2 CaN, O10 476.53 Cu D-泛醇 205.25 D-panthenol 81-13-0 Cg Hig NO. 4.6 三氯甲烷：分析纯。 4.7 乙酸丁酯：分析纯。 4.8 异辛烷：分析纯。 4.9 0.2mol/L甲酸：移取3.8mL甲酸（4.4），用水稀释定容至500mL。 4.100.1mol/L甲酸：移取1.9mL甲酸（4.4），用水稀释定容至500mL。 4.11 醋酸锌溶液：称取21.9gC,HO,Zn·2H2O（分析纯），用0.2mol/L甲酸（4.9）溶解并定容至 100 mL. 4.12 亚铁氰化钾溶液：称取10.6gK，Fe(CN)。3H,O（分析纯），用水溶解并定容至100mL。 4.13 4.14 40%甲醇水溶液：甲醇（4.3）：蒸馏水体积比（2十3）。 4.15 Cl：固相萃取小柱：200mg/3mL，使用前，依次用3mL甲醇（4.3）、3mL蒸馏水进行活化。 4.16 一次性针式样品过滤器：0.2μm，尼龙膜。 4.177 标准储备溶液：分别准确称取标准物质泛酸1.0g（或1.1g泛酸钠或者泛酸钙，折合为泛酸 1.0g）和D-泛醇1.0g（以上质量均精确至0.1mg）.用蒸馏水溶解定容至25mL，配置成浓度为 40mg/mL的标准储备液于4℃～6℃条件下保存。 均为20mg/mL的溶液，然后用蒸馏水稀释配置成泛酸和泛醇浓度均分别为1ug/mL、10μg/mL、 50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL、800μg/mL、1000μg/mL的系列标准混合溶液于 4℃～6℃条件下保存（适用于高效液相色谱紫外检测法）。 泛酸和D-泛醇浓度均分别为1μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L、400μg/L、800μg/L和 1000μg/L的系列标准溶液于4℃6℃条件下保存（适用于高效液相色谱串联质谱法）。 2 GB/T 27577—2011 5仪器和设备 5.2高效液相色谱仪串联四级杆质谱（ESI源）（高效液相色谱串联质谱法）。 5.3分析天平：感量0.1mg0.01mg。 5.4氮吹仪。 5.5漩涡混合器。 5.6超声波清洗器。 5.7 离心机：转速不小于5000r/min，离心试管容量15mL。 5.8 移液枪或移液器。 6试样制备 6.1化妆水、乳液、中性及弱油性膏霜等水易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，50℃条件下氮吹，尽量除去样品中的 水分。向离心管中加人3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10)及200uL醋酸锌溶液（4.11)，涡旋混合使样品 均匀分散，然后向溶液中准确添加200uL亚铁氰化钾溶液（4.12），震荡摇匀，向离心管中加人3mL三 氯甲烷（4.6），涡旋混合2min，然后于5000r/min离心5min~20min。 准确移取2mL上层溶液过Cl8固相萃取小柱（4.15）,1mL0.1mol/L甲酸（4.10）淋洗柱床后，在 小柱出口处放置2mL小试剂瓶，准确添加1mL40%甲醇水溶液（4.14）淋洗柱床，收集流出溶液，涡旋 混合，待测。 6.2油性膏霜、油剂类化妆品等水不易分散的化妆品样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，先向离心管中加人2mL三氯甲烷 （4.6），涡旋混合至样品均匀分散后，再向离心管中准确加入3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10）及200uL 醋酸锌溶液（4.11），涡旋混合2min后，继续向离心管中准确加人200μL亚铁氰化钾溶液（4.12），涡旋 混合后，于5000r/min离心5min～20min。 余下步骤与6.1相同。 6.3唇膏、唇彩、发蜡等蜡基化妆品样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，向离心管中加人2mL异辛烷 （4.8），涡旋，若样品不能够完全分散，需将离心管置于80℃水浴中5min，待样品完全融化后，向离心 管中准确加大3.6mL0.1mol/L甲酸（4.10）（80℃水浴预热）及200μL醋酸锌溶液（4.11），涡旋 1min后，将离心管重新置于80℃水浴平衡5min，取出再涡旋1min。待冷却后，向溶液中准确添加 200μL亚铁氰化钾溶液（4.12）及2mL三氯甲烷（4.6），震荡摇匀，必要时于5000r/min离心5min~ 20min。若样品能够完全分散，则无需水浴加热，直接向离心管中准确加入3.6mL0.1mol/L甲酸 （4.10)（80℃水浴预热）及200μL醋酸锌溶液（4.11），涡旋2min，然后向溶液中准确添加200μL亚铁 氰化钾溶液（4.12），涡旋混合。必要时于5000r/min离心5min～20min。 余下步骤与6.1相同。 6.4指甲油样品的制备 称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，向离心管中加人2mL乙酸丁酯-三 3