ICS 65.020.30 B 43 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 27642—2011 牛个体及亲子鉴定微卫星DNA法 Bovine individual and parental identification using microsatellite DNA 2011-12-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 27642—2011 目 次 前言 II 范围 1 规范性引用文件 2 术语、定义和缩略语· 3 4 原理 5防污染措施 6个体鉴定和亲子鉴定试验步骤 附录A（资料性附录） 试剂配制及仪器 附录B（资料性附录）DNA样品的制备 附录C（资料性附录）光谱校正和PCR反应、测定及分析 附录D（资料性附录） FAO-ISAG推荐的牛微卫星DNA标记 附录E（资料性附录）个体及亲子鉴定计算方法 12 GB/T 27642—2011 前言 本标准按照GB/T1.1—2009的规则进行起草。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274)归口。 本标准起草单位：全国畜牧总站。 本标准主要起草人：刘丑生、王志刚、孙飞舟、邱小田、韩旭、于福清、张桂香 GB/T27642—2011 牛个体及亲子鉴定微卫星DNA法 1范围 本标准规定了利用微卫星DNA标记进行牛个体及亲子鉴定的技术规程。 本标准适用于普通牛（Bostaurus）个体和亲子鉴定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GA/T383法庭科学DNA实验室检验规范 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3术语、定义和缩略语 下列术语、定义和缩略语适用于本文件。 3. 1 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction,PCR 以一对寡核苷酸引物、四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs)为原料，在合适的温度、离子条件和耐热 DNA聚合酶催化下，在体外人工合成特异的DNA片段的过程。 3.2 微卫星DNAmicrosatelliteDNA 亦称短串联重复序列或简单重复序列（shorttandemrepeats，STRs；simplesequencerepeats， SSRs),以1bp～6bp的短核苷酸序列为基本单位，呈串联重复状散在分布于生物体基因组中。 3.3 非父排除概率probabilityof paternityexclusion，PE 通过检测某一个遗传标记，能将不是生父的争议父亲排除的概率。 3. 4 累积非父排除概率 cumulativeprobability of paternity exclusion,CPE 通过检测某一遗传标记系统的多个遗传标记，将不是生父的个体否定掉的累计概率。 3.5 亲权指数paternityindex，PI 争议父亲提供生父等位基因成为子代生父的概率与随机公畜提供生父基因成为子代生父概率的 比值。 3. 6 累积亲权指数 cumulativepaternity index,CPI 根据某一遗传标记系统中的多个标记，计算多个亲权指数的累积。 3.7 父子关系相对概率 relativechance ofpaternity,RCP 争议父亲是亲生父亲的相对概率。 1 GB/T276422011 4原理 4.1个体鉴定原理 某一被检样品与真样品微卫星标记的基因型不同，则判定被检样品与真样品来自不同个体，如果相 同不排除它们来自同一个体，通过对某一遗传标记系统的多个标记所检测，可在一定概率水平上判定被 测样品与真样品是否来自同一个体。 4.2亲子鉴定原理 根据孟德尔遗传分离定律，在配子细胞形成时，成对的等位基因彼此分离，随机进入配子细胞。双 亲的配子细胞结合形成合子，其发育出来的子代的成对等位基因分别来自交亲和母亲。根据多个标记 计算的鉴定结果在一定概率水平上可以判定争议父亲（母亲）是否为亲生父亲（母亲）（变异情况除外）。 5 防污染措施 按SN/T1193和GA/T383规定的方法执行。 6个体鉴定和亲子鉴定试验步骤 6.1样品制备 收集血液、组织（耳、肌肉、尾、皮肤等）、毛囊或精液等材料 6.2样品DNA的制备 各样品试剂配方、所需的仪器设备参见附录A，具体步骤参见附录B。 6.3光谱校正 在实验前进行一次四色荧光素的光谱校正，目的为了校准信号重叠。具体步骤参见C.1。 6.4微卫星DNA标记 参见附录D。 6.5 PCR反应 6.5.1PCR反应体系 参见表C.1。 6.5.2 PCR反应程序 参见表 C.2。 6. 5. 3 PCR产物电泳检测 2