ICS 71. 100.70 Y 42 GD 中华人民共和国国家标准 GB/T29664—2013 化妆品中维生素B3（烟酸、烟酰胺）的测定 高效液相色谱法和 高效液相色谱串联质谱法 Determination of vitamin B (nicotinic acid and nicotinamide) in cosmetics-HPLC and HPLC-MS/MS 2013-09-06发布 2014-02-15实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T29664—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：大连市产品质量监督检验所（国家日化产品质量监督检验中心）、上海市日用化学 工业研究所（国家香料香精化妆品质量监督检验中心）、大连标准检测技术研究中心 本标准主要起草人：毛希琴、郑顺利、胡侠、孙稚菁、吴海霞、潘炜、武晓剑、康薇。 I GB/T29664—2013 化妆品中维生素B3（烟酸、烟酰胺）的测定 高效液相色谱法和 高效液相色谱串联质谱法 1范围 谱法。 本标准适用于膏霜、乳液、化妆水、皂基如美容皂、蜡基如唇膏等化妆品中维生素B（烟酸、烟酰胺） 的定量测定，其中高效液相色谱法对烟酸、烟酰胺的检出限均为2ug/g，定量限均为6ug/g；高效液相 色谱串联质谱法对烟酸、烟酰胺的检出限均为100μg/kg，定量限均为300μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 烟酸、烟酰胺为极性化合物易溶于水相，化妆品中的油溶性成分易溶于有机相，而化妆品中的表面 活性剂则富集于有机相与水相界面处。利用水和二氯甲烷（或异辛烷）双液相体系将目标物与化妆品中 油溶性成分及表面活性剂初步分离。酸性条件下用反相及强阳离子交换混合型固相萃取材料吸附富集 目标物，脱除干扰物质后，洗脱，定容，用反相高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测（高效液相色谱 法）或串联四级杆质谱检测（高效液相色谱串联质谱法），标准曲线外标法定量。 4试剂和材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2甲醇：分析纯。 4.3 氨水：分析纯。 4.4甲酸：色谱纯。 4.5甲酸：分析纯。 4.6 二氯甲烷：分析纯。 4.7异辛烷：分析纯。 4.82%甲酸水溶液：移取2mL甲酸（4.5），用水稀释定容至100mL。 4.92%氨水氨化甲醇：移取2mL氨水（4.3），用甲醇稀释定容至100mL。 4.101%甲酸水溶液：移取1mL甲酸（4.5），用水稀释定容至100mL。 1 GB/T29664—2013 4.11Strara-X-C固相萃取小柱或相当者：60mg，3mL。使用前，依次用2mL甲醇和2mL水活化。 4.12标准储备液：准确称取烟酸和烟酰胺标准物质各250mg分别置于两个25mL的棕色容量瓶中， 用蒸馏水溶解定容，配置成浓度为10mg/mL的标准储备溶液，于4℃～6℃条件下保存。保存期一般 不应超过2周。 4.13系列标准溶液 4.13.1系列标准溶液A：首先将两种标准储备液等体积混合，配置成5mg/mL的混合标准溶液，然 后用2%甲酸水（4.8）稀释配置成烟酸和烟酰胺浓度均分别为1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、 50μg/mL、100μg/mL、500μg/mL1000μg/mL的系列标准混合溶液用于液相色谱测试。以上系列 标准溶液，均需现用现配。 4.13.2系列标准溶液B：首先将两种标准储备液等体积混合，配置成5mg/mL的混合标准溶液，然后 用2%甲酸水（4.8）稀释配置成烟酸和烟酰胺浓度均分别为5μg/L、10uμg/L、50ug/L、100μg/L、 500μg/L、1000μg/L的系列标准混合溶液用于液质联用测试。以上系列标准溶液，均需现用现配。 4.140.2μm微孔尼龙滤膜。 4.15标准物质见表1。 表1标准物质英文名称、INCI名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度 化合物名称 烟酰胺 英文名称 Nicotinic acid Nicotinamide INCI名称 Niacin Niacinamide CAS号 59-67-6 98-92-0 分子式 C,H,NO? CH, Nz O O IIN 分子结构式 相对分子质量 123.11 122.13 纯度 ≥99. 0% 5仪器和设备 5. 1 高效液相色谱仪-二极管阵列检测器（高效液相色谱法）。 5.2 高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪（ESI源）（高效液相色谱串联质谱法）。 5.3 分析天平：感量0.1 mg;0.01 mg。 5. 4 氮吹仪。 5.5 漩涡混合器。 5.6 超声波清洗器。 5.7 离心机：转速不小于5000r/min，离心试管容量15mL。 5.8 移液枪或移液器。 2 GB/T29664—2013 6试样制备 6.1膏霜、乳液、化妆水、洗发水等化妆品样品的制备 6.1.1称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，60℃条件下氮吹，尽量除去样品 中的水分。向离心管中准确加入4mL2%甲酸水溶液（4.8），涡旋混合使样品均匀分散后超声15min~ 30min，向离心管中加人3mL二氯甲烷（4.6），涡旋混合2min，然后于5000r/min离心5min～ 20 min。 6.1.2准确移取1mL上层溶液过Strara-X-C固相萃取小柱（4.11），待自然流干后，依次加入1mL 1%甲酸水溶液（4.10）和1mL甲醇（4.2)淋洗柱床，最后添加4mL2%氨水氨化甲醇（4.9)进行洗脱， 待自然流干后，吹出柱床内溶液并收集所有流出溶液，氮吹挥干溶剂，准确添加1mL水溶解，涡旋混合 6.2美容皂等固态基类化妆品样品的制备 6.2.1用刮铲或小刀将皂基样品刨成碎屑或丝状薄片，刨碎后迅速密封在容器中，并尽快进行称量。 称取0.2g（精确至0.01g），于15mL具塞塑料离心管中，先向离心管中准确加人4mL2%甲酸水溶液 （4.8）并置于沸水浴中5min～10min使皂基融化，涡旋混合使样品溶解并均匀分散，待冷却，继续向离 心管中加人3mL二氯甲烷（4.6），涡旋混合2min后，于5000r/min离心5min~20min。 6.2.2余下步骤与6.1.2相同。 注：由于皂基变成碎屑或薄片时，样品表面积显著增大，皂中的水分会迅速挥发，带来称量误差。因此建议尽量缩 短取皂、碎皂及称量的时间，且实验室湿度高于50%，温度低于25℃。 6.3唇膏等蜡基化妆品样品的制备 6.3.1称取0.2g样品（精确至0.01g）于15mL具塞塑料离心管中，向离心管中加入2mL异辛烷 （4.7），涡旋。若样品不能够完全分散，需将离心管置于80℃水浴中3min～5min，待样品完全融化后， 向离心管中准确加入4mL2%甲酸水溶液（4.8）（80℃水浴预热），涡旋1min后，将离心管重新置于 80℃水浴平衡5min，取出再涡旋1min。若样品能够完全分散，则无需水浴加热，直接向离心管中准确 加人4mL2%甲酸溶液（4.8）（80℃水浴预热），涡旋2min。必要时于5000r/min离心5min～ 20 min。 6.3.2取1mL下层水相，0.2μm微孔尼龙滤膜（4.14)过滤，待测。如遇干扰，可参照步骤6.1.2对 样品进行净化处理。 注：对烟酸、烟酰胺含量超过1%的化妆品样品建议将提取溶液2%甲酸水溶液的体积增加为8mL，其他条件不变 以避免超出固相萃取小柱的柱负载量，导致目标物回收率的降低。 7分析步骤 7.1高效液相色谱法 SAC 7.1.1液相色谱分析参考条件 液相色谱测定的参考条件如下： a） 色谱柱：SB-Aq（或相当者），1.8μm，3mm×100mm； b) 柱温：30℃； c） 流动相：A为100%水（含0.1%甲酸）；B为100%甲醇（含0.1%甲酸）； 3