ICS 65.020.20 B 31 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1963—2019 番木瓜组培苗生产技术规程 Technical regulations of Carica papaya L tissue culture seedling production 2019 - 05 - 31 发布 广西壮族自治区市场监督管理局 2019 - 06 - 30 实施 发 布 — DB45/T 1963 2019 前 言 本标准根据 GB/T 1.1—2009 给出的规则编写。 本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。 本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所、广西植物组培苗有限公司。 本标准主要起草人：林茜、韩晓华、高营营、黄天琨、张露、潘永杰、牟海飞、张进忠、王艳、 林贵美、罗松、谢宏昭、韦泽昭。 II — DB45/T 1963 2019 番木瓜组培苗生产技术规程 1 范围 本技术规程规定了番木瓜（Carica papaya L.）组培苗生产的术语和定义、外植体要求、组培苗生 产、营养杯苗育苗技术、病虫害及其防治、出圃、包装及运输。 本技术规程适用于广西番木瓜组培苗生产。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。 2.1 番木瓜 Carica papaya L. 又称木瓜、乳瓜、万寿果，番木瓜科、番木瓜属大型多年生草本植物。 2.2 外植体 explant 用于接种培养的各种离体植物材料，本规程中的外植体为番木瓜嫩芽茎尖。 2.3 番木瓜组培瓶苗 Carica papaya L. tissue culture bottle seedlings 通过植物组织培养技术使之在培养容器内生长且达到整齐、均一、健壮的番木瓜组培继代苗。 2.4 番木瓜组培袋苗 Carica papaya L. tissue culture bag seedlings 已达室外炼苗标准且根、茎、叶俱全的袋装番木瓜组培小植株。 2.5 番木瓜组培营养杯苗 Carica papaya L. tissue culture nutritive cup seedlings 将组培袋装番木瓜无菌小植株植入营养杯中，经室外育苗，达可出圃供大田定植的番木瓜杯苗。 2.6 继代培养 subculture 在培养过程中，将培养物周期性地转接在新鲜培养基上进行再培养，从而使之得以成倍增殖的过程。 2.7 生根培养 rooting culture 1 — 将继代增殖苗转移至生根培养基中，诱导根的分化和根系的形成，最终发育成完整小植株的培养过 DB45/T 1963 2019 程。 2.8 玻璃化 vitrification 试管苗呈半透明水渍状，外观形态异常的现象。 2.9 番木瓜病毒病 Carica papaya L. virus disease Papaya ringspot virus 又称番木瓜环斑花叶病（PRSV（ ）），是番木瓜的一种毁灭性病害。 3 外植体要求 3.1 种质园的选定 品种纯正，无病虫害的番木瓜母本园。 3.2 外植体的选取 取自母本园农艺性状表现优良、无番木瓜环斑花叶病病毒、经多年筛选的品种纯正、高产成年植株 为采芽母株，以当年生嫩芽为外植体。 3.3 外植体的消毒 用市售洗涤液（洗衣液、洗洁精等）对外植体进行前期清洁处理，随之在无菌条件下依次以75％酒 精溶液浸泡30 s、5％次氯酸钠溶液浸泡3 min、0.1％氯化汞溶液浸泡10 min消毒（每种消毒液浸泡后， 均需用无菌水冲洗外植体4～5次），获得无菌外植体。 3.4 外植体的接种 将无菌外植体在实体显微镜下挑取1 mm大小茎尖生长点，接种在诱导培养基中。 3.5 病毒检测 无菌外植体经继代培养增殖一代后，对母株及其相应无菌外植体进行PRSV病毒检测，经检测无PRSV 病毒的植株增殖芽方可继续进行继代培养。 4 组培苗生产 4.1 番木瓜组培瓶苗 将外植体组培诱导获得的正常、健壮、无玻璃化丛芽进行继代培养，切成2～3芽/丛转接到瓶装新 鲜培养基上，以6丛/瓶为宜，培养温度26 ℃±2 ℃、光照强度1 500 lx～3 000 lx、增殖系数2.0～2.5、 继代周期18 d～22 d。 组培瓶苗质量要求参见附录A。 4.2 番木瓜组培袋苗 2 — 选择叶色浓绿正常、茎秆粗壮、枝叶舒展、株高1.5 cm～3.0 cm的组培瓶苗进行生根培养。将丛苗 切成单株，6株/袋，高度均匀摆放。培养温度26 ℃±2 ℃、光照强度1 500 lx～3 000 lx，袋苗培养5 d～ 7 d有根生成，培养周期以10 d～15 d为宜。 组培袋苗质量要求参见附录A。 DB45/T 1963 2019 4.3 增殖代数 增殖代数控制在12代内。 5 营养杯苗育苗技术 5.1 育苗时期 春季宜在3月～5月，夏秋季宜在8月～11月。 5.2 育苗条件 5.2.1 温度及光照 番木瓜育苗温度15 ℃～32 ℃，最适温度25 ℃～30 ℃；光照强度5 000 lx～10 000 lx。 5.2.2 基质 应保湿、疏松、透气，以草炭：园土：河沙：有机肥=5:3.5:1:0.5 的微酸性至中性基质为宜。 5.2.3 水分 培养基质宜保持湿润、不积水，含水量应控制在最大持水量的 70％。 5.3 育苗管理 5.3.1 基质与育苗杯的处理 将装好基质的育苗杯淋透水后，用多菌灵1 000倍液+农用链霉素2 000倍液喷淋杀菌。 5.3.2 假植 将经炼苗驯化后的组培袋装生根苗用清水洗净基部培养基，以 5 000 倍高锰酸钾溶液浸泡消毒 20 s， 装杯假植。 5.3.3 假植期管理 假植后淋定根水，用多菌灵1 000倍液+农用链霉素2 000倍液喷淋植株叶面，搭小拱棚并用薄膜覆盖 密封。 假植后3 d～5 d，在棚顶薄膜上打小孔透气，每天依次扩大小孔开口面积，15 d后可初次打开拱棚 两侧薄膜，17 d后全部打开，若中午强光影响小苗正常生长，可适度盖膜保湿，避免小苗叶片失水。小 苗管理期内应特别注意遮阳工作，光照强度严格控制在5.2.1所提范围内。 待苗成活后，可逐步增加光照，进入正常管理，每 7 d 淋水肥（N:P O :K O=15:15:15）一次，每 5 d～ 7 d 喷杀菌药（多菌灵 1 000 倍液+农用链霉素 2 000 倍液）一次，每 15 d 喷杀虫剂一次。 2 5 2 6 病虫害及其防治 3 — DB45/T 1963 2019 6.1 病害 育苗中出现的病害主要有茎腐病及炭疽病。 防治方法参见附录B。 6.2 虫害 育苗中出现的虫害主要有叶蛾、红蜘蛛。 防治方法参见附录B。 7 出圃 7.1 杯苗规格 番木瓜组培营养杯苗的出圃规格要求无病虫害、株高以15 cm为宜、叶片5～7张、根系正常并盘绕 住营养杯中基质。 番木瓜组培苗生产工艺流程图参见附录C。 8 包装、运输及贮藏 8.1 产品包装 将达到出圃规格的营养杯苗装入打有透气孔的泡沫箱内，60株/箱，每件包装箱内附含标签，标签 内容包括品种、种苗规格、数量、检验证书、生产单位、出厂或出圃日期等信息。 8.2 产品运输 组培营养杯苗装车时务必小心轻放，运输车辆应具备车篷，并保证通风透气，运输中避免日晒雨淋， 运输时间以2 d内为宜。 8.3 产品贮藏 番木瓜组培营养杯苗在出厂（圃）包装后应及时在当日安排运输，到达目的地后立刻卸车，放置在 通风阴凉处，打开包装，及时种植。如不能按时定植，应放于通风、有漫反射光线的荫棚，适当保湿保 温，存放时间不超过7 d。 4 — DB45/T 1963 2019 AA 附 录 A （资料性附录） 番木瓜组培苗质量要求 番木瓜组培苗质量要求见表 A.1。 表A.1 番木瓜组培苗质量要求 规格 组培 瓶苗 项目 指标 品种纯度 规格 项目 指标 ≥98％ 品种纯度 ≥98％ 真菌污染 无 真菌污染 无 细菌污染 无 细菌污染 无 培养代数 ≤13 茎段形态 舒展 培养时间 ≤12 个月 叶片颜色 青绿 叶柄形态 舒展 叶脉颜色 黄绿 叶片形态 舒展 株高（cm） 3～4 茎部颜色 黄绿 叶片数量 3叶 叶片颜色 翠绿 根数 ≥4 条 玻璃化 无 根系形态 白皙无膨化 变异率 ≤3％ 变异率 ≤3％ 组培 袋苗 5 — DB45/T 1963 2019 BB 附 录 B （资料性附录） 番木瓜育苗期病虫害防治方法 番木瓜育苗期病虫害防治方法见表B.1。 表B.1 番木瓜育苗期病虫害防治方法 6 病虫害种类 防治方法 备注 茎腐病 金雷多米尔 800 倍液每 15 d 喷施一次 下午 17:00 后 炭疽病 大生（代森锰锌）1 000 倍液每 15 d 喷施一次 喷施 叶蛾 棉铃虫核形多角体病毒 1 000 倍液喷施叶面一次 红蜘蛛 阿维菌素 1 000 倍液喷施 下午喷施 — DB45/T 1963 2019 附 录 C （资料性附录） 番木瓜组培苗生产工艺流程图 见 番木瓜组培苗生产工艺流程图 图 C.1。 脱病母本园 （隔离区） ↓ 优良母株 ↓ 外植体 （嫩芽） ↓ 消毒灭菌 继代培养 （丛生芽） → → 生根培养 （切割分株） PRSV病毒检测 外植体 （1代芽） → 诱导培养 ↓ 炼苗及育苗 ↓ 出圃 ↓ 大田种植 图 C.1 番木瓜组培苗生产工艺流程图 _________________________________ 7 中华人民共和国广西地方标准 番木瓜组培苗生产技术规程 DB45/T 1963―2019 广西壮族自治区市场监督管理局统一印刷 版权专有 侵权必究