(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110750422.0 (22)申请日 2021.07.02 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113402617 A (43)申请公布日 2021.09.17 (73)专利权人 青岛华赛伯曼医学细胞生物有限 公司 地址 266200 山东省青岛市 即墨区鳌山 卫 青岛蓝色硅 谷海科创业中心D楼808室 (72)发明人 龚拯　李亚腾　李斌　李文静　 高青　刁树青　王泽瑶　 (74)专利代理 机构 北京信诺创成知识产权代理 有限公司 1 1728 专利代理师 陈悦军　尹吉伟 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 106399255 A,2017.02.15 CN 112480264 A,2021.0 3.12 Shiran Ho ogi等.A TIGIT-based c himeric co-stimulatory sw itch receptor improves T-cell anti-tumor functi on. 《Journal for ImmunoTherapy of Cancer》 .2019,摘要、 第2页 右栏第3段至第10页右栏第1段. Shiran Ho ogi等.A TIGIT-based c himeric co-stimulatory sw itch receptor improves T-cell anti-tumor functi on. 《Journal for ImmunoTherapy of Cancer》 .2019,摘要、 第2页 右栏第3段至第10页右栏第1段. Hasan MM等.Accession NO.:NP_7 76160.2， T-cell immunoreceptor w ith Ig and ITIM domains precursor [Homo sapiens ]. 《Genban k Database》 .2021,DEFI NITION、 SOURC E、 FEATURES 及ORIGIN部分. 审查员 李婧文 (54)发明名称 蛋白复合物及其应用 (57)摘要 本发明属于免疫 学和分子生物学技术领域， 具体涉及一种蛋白复合物及其应用。 本发明提供 的蛋白复合物包括T IGIT的胞外 段、 TIGIT的跨膜 区、 CD28的胞内段， 以及4 ‑1BB的胞内段， 其结构 设计不仅可以解除肿瘤微环境原本对免疫效应 细胞的抑制， 同时共刺激信号分子还 可以反过来 进一步增强免疫效应细胞的免疫功能。 此外， 本 发明提供的蛋白复合物还可以提升免疫效应细 胞的增殖能力， 实现免疫效应细胞的大量扩增。 权利要求书1页 说明书13页 序列表7页 附图4页 CN 113402617 B 2022.08.23 CN 113402617 B 1.一种蛋白复合物， 其特征在于， 所述 蛋白质复合物的氨基酸序列如SEQ  ID NO: 15或 16所示。 2.一种免疫抑制 ‑共刺激信号转换分子， 其特征在于， 包括权利要求1所述的蛋白复合 物。 3.一种多 核苷酸， 其特 征在于， 所述多 核苷酸编码权利要求1所述的蛋白复合物。 4.根据权利要求3所述的多核苷酸， 其特征在于， 所述多核苷酸的序列如SEQ  ID NO:  17或SEQ ID NO: 18所示。 5.一种表达载体， 其特 征在于， 包括权利要求3或4所述的多 核苷酸。 6.根据权利要求5所述的表达载体， 其特征在于， 所述表达载体选自慢病毒载体、 逆转 录病毒载体、 腺相关病毒载体、 腺病毒载体、 转 座子载体系统中的至少一种。 7.一种细胞， 其特 征在于， 包括权利要求5或6所述的载体。 8.根据权利要求7 所述的细胞， 其特 征在于， 所述细胞为T细胞或NK细胞。 9.根据权利要求8所述的细胞， 其特征在于， 所述细胞为记忆T细胞、 滤泡辅助性T细胞、 调节性T细胞或肿瘤浸润T淋巴细胞。 10.一种免疫效应细胞， 其特征在于， 所述免疫效应细胞表达权利要求1所述的蛋白复 合物。 11.根据权利要求10所述的免疫效应细胞， 其特征在于， 所述免疫效应细胞为T细胞或 NK细胞。 12.根据权利要求11所述的免疫效应细胞， 其特征在于， 所述免疫效应细胞为记忆T细 胞、 滤泡辅助性T细胞、 调节性T细胞或肿瘤浸润T淋巴细胞。 13.一种药物组合物， 其特征在于， 包括权利要求7 ‑9任一项所述的细胞、 权利要求10 ‑ 12任一项所述的免疫效应细胞中的至少一种。 14.权利要求13所述的药物组合物在制备预防或治疗肿瘤的药物中的用途， 所述肿瘤 为肺癌、 宫颈癌、 黑色素瘤、 胃癌和/或乳腺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113402617 B 2蛋白复合物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及免疫学和分子生物学领域， 尤其涉及一种蛋白复合物， 一种免疫抑制 ‑ 共刺激信号转换分子， 一种多核苷 酸， 一种表达载体， 一种细胞， 一种免疫效应细胞， 以及一 种药物组合物及其在制备 预防或治疗肿瘤的药物中的用途。 背景技术 [0002]过继细胞治疗(Adoptive  Cell Therapy,ACT)是将经体外处理的自体或异体免疫 细胞回输给患者， 以增强患者免疫功能， 达到治疗目的的方法。 当前肿瘤ACT进展迅速， 在 多 种类型恶性肿瘤的临床治疗中取 得了非常好的疗效。 [0003]在各种ACT中， 使用肿瘤 浸润淋巴细胞(Tumor  Infiltrating  Lymphocyte,TIL)在 肿瘤治疗中已经被证明是一种非常成功的方法。 TIL的ACT 能够成功主要原因在于两方面： 1)对于自体肿瘤表现出多样的抗原特异性； 2)能够裂解并根除肿瘤。 尽管取得了一定的成 功， TIL治疗也面临以下技术难关： 1)体外扩增往往有困难， 尤其目前的TIL治疗需要大于 1010个细胞数量级； 2)TI L细胞大多数为 耗竭细胞， 进入体内要克服肿瘤的免疫抑制环境。 [0004]因此， 目前亟需一种能够有效克服肿瘤微环境的免疫抑制的方法。 发明内容 [0005]本发明目的在于提供一种蛋白复合物， 一种免疫抑制 ‑共刺激信号转换分子， 一种 多核苷酸， 一种表达载体， 一种细胞， 一种免疫效应细胞， 以及一种药物组合物及其在制备 预防或治疗肿瘤的药物中的用途， 旨在解决现有ACT疗法中存在肿瘤微环境对回输的细胞 存在免疫抑制的技 术问题。 [0006]为了实现上述发明目的， 本发明一方面， 提供了一种蛋白复合物， 其包括T细胞免 疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(T  cell immunoreceptor  with Ig and ITIM domains, TIGIT)的胞外段、 TIGIT的跨膜区、 CD28的胞内段， 以及4 ‑1BB的胞内段。 [0007]在一些实施方案中， 蛋白复合物还包括TIGIT的部分胞内段。 进一步地， 该TIGIT的 胞内段的N端与跨膜区的C端连接。 更进一步地， 该TIGIT的胞内段的氨基酸序列如SEQ  ID  NO:1所示， 编码该TIGIT的胞内段的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示； 胞外段的氨基酸序列 如SEQ ID NO:3所示， 编码胞外段的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示， 跨膜区的氨基酸序列 如SEQ ID NO:5所示， 编码跨膜区的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示， CD28的胞内段的氨基 酸序列如SEQ  ID NO:7所示， 编码CD28的胞内段的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示， 4 ‑1BB的 胞内段的氨 基酸序列如SEQ  ID NO:9所示， 编码4 ‑1BB的胞内段的核苷酸序列如SEQ  ID NO: 10所示。 [0008]在一些实施方案中， 蛋白复合物还包括连接肽(link)， 其连接CD28的胞内段与4 ‑ 1BB的胞内段。 进一步地， 连接肽的氨基酸序列如SEQ  ID NO:11所示， 编码连接肽的核苷酸 序列如SEQ  ID NO:12所示。 [0009]在一些实施方案中， 蛋白复合物还包括信号肽， 该信号肽的C端与TIGIT的胞外段说　明　书 1/13 页 3 CN 113402617 B 3