书 书 书中华人民共和国国家标准 犌犅 １５１９３ ． ６ — ２０１４ 食品安全国家标准 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 ２０１５  ０１  ２８ 发布 ２０１５  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会 发布 书 书 书犌犅 １５１９３ ． ６ — ２０１４ Ⅰ 　　　　前 　　 言 　　 本标准代替 ＧＢ１５１９３．６ — ２００３ 《 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 》。 本标准与 ＧＢ１５１９３．６ — ２００３ 相比 ， 主要变化如下 ： ——— 标准名称修改为 “ 食品安全国家标准 　 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 ”； ——— 修改了范围 ； ——— 增加了术语和定义 ； ——— 修改了试验目的和原理 ； ——— 修改了试验方法 ； ——— 修改了数据处理 。 犌犅 １５１９３ ． ６ — ２０１４ １ 　　　　食品安全国家标准 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 １ 　 范围 本标准规定了哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验的基本试验方法和技术要求 。 本标准适用于评价受试物对哺乳动物骨髓细胞的遗传毒性 。 ２ 　 术语和定义 ２ ． １ 　 染色体结构畸变 通过显微镜可以直接观察到的发生在细胞有丝分裂中期的染色体结构变化 。 如染色体中间缺失和断片 ， 染色体互换和内交换等 。 结构畸变可分为染色体型畸变 （ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｔｙｐｅａｂｅｒｒａｔｉｏｎ ） 和染色单体型畸变 （ ｃｈｒｏｍａｔｉｄｔｙｐｅａｂｅｒｒａｔｉｏｎ ）。 ２ ． ２ 　 染色体型畸变 染色体结构损伤 ， 表现为在两个染色单体的相同位点均出现断裂或断裂重组的改变 。 ２ ． ３ 　 染色单体型畸变 染色体结构损伤 ， 表现为染色单体断裂或染色单体断裂重组的损伤 。 ２ ． ４ 　 染色体数目畸变 染色体数目发生改变 ， 不同于正常核型 。 ２ ． ５ 　 核内复制 在 ＤＮＡ 复制的 Ｓ 期之后 ， 细胞核未进行有丝分裂就开始了另一个 Ｓ 期的过程 。 其结果是染色体有 ４ 、 ８ 、 １６ … 倍的染色单体 。 ２ ． ６ 　 裂隙 染色体或染色单体损伤的长度小于一个染色单体的宽度 ， 为染色单体的最小错误排列 。 ２ ． ７ 　 有丝分裂指数 中期相细胞数与所观察的细胞总数之比值 。 ３ 　 试验目的和原理 在试验动物给予受试物后 ， 用中期分裂相阻断剂 （ 如秋水仙素或秋水仙胺 ） 处理 ， 抑制细胞分裂时纺锤体的形成 ， 以便增加中期分裂相细胞的比例 ， 随后取材 、 制片 、 染色 、 分析染色体畸变 。 本试验可检测受试物能否引起整体动物骨髓细胞染色体畸变 ， 以评价受试物致突变的可能性 。 若 犌犅 １５１９３ ． ６ — ２０１４ ２ 　　　　 有证据表明受试物或其代谢产物不能到达骨髓 ， 则不适用于本方法 。 ４ 　 仪器和试剂 ４ ． １ 　 仪器 实验室常用设备 、 恒温水浴锅 （ ３７℃±５℃ ）、 离心机 、 生物显微镜 。 ４ ． ２ 　 试剂 ４ ． ２ ． １ 　 秋水仙素 （ ０．４ｍｇ ／ ｍＬ ）： 置于棕色瓶中 ， 冰箱保存 。 ４ ． ２ ． ２ 　 氯化钾溶液 （ ０．０７５ｍｏｌ ／ Ｌ ）。 ４ ． ２ ． ３ 　 固定液 ： 甲醇与冰醋酸以 ３∶１ 混合 ， 临用时现配 。 ４ ． ２ ． ４ 　 姬姆萨 （ Ｇｉｅｍｓａ ） 储备染液 ： 取 Ｇｉｅｍｓａ 染料 ３．８ｇ 和少量甲醇于乳钵里仔细研磨 ， 逐渐加入甲醇至 ３７５ｍＬ ， 待完全溶解后 ， 再加入 １２５ｍＬ 甘油 ， 混合均匀 。 置 ３７℃ 恒温箱中保温 ４８ｈ 。 保温期间振摇数次 ， 促使染料的充分溶解 。 取出过滤 ， 室温保存 ， 两周后使用 。 ４ ． ２ ． ５ 　 Ｇｉｅｍｓａ 应用染液 ： 取 １ 份 Ｇｉｅｍｓａ 储备染液与 ９ 份磷酸盐缓冲液 （ １ ／ １５ｍｏｌ ／ Ｌ ） 混合而成 。 临用时配制 。 ４ ． ２ ． ６ 　 磷酸盐缓冲液 （ ｐＨ６．８ ）。 ４ ． ２ ． ６ ． １ 　 磷酸氢二钠溶液 （ １ ／ １５ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 磷酸氢二钠 （ Ｎａ ２ ＨＰＯ ４ ） ９．４７ｇ 溶于 １０００ｍＬ 去离子水中 。 ４ ． ２ ． ６ ． ２ 　 磷酸二氢钾溶液 （ １ ／ １５ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 磷酸二氢钾 （ ＫＨ ２ ＰＯ ４ ） ９．０７ｇ 溶于 １０００ｍＬ 去离子水中 。 ４ ． ２ ． ６ ． ３ 　 取磷酸氢二钠溶液 （ １ ／ １５ｍｏｌ ／ Ｌ ） ５０ｍＬ 与磷酸二氢钾溶液 （ １ ／ １５ｍｏｌ ／ Ｌ ） ５０ｍＬ 混合 。 ４ ． ２ ． ７ 　 阳性对照物 ： 常用环磷酰胺 ， 丝裂霉素 Ｃ 等 。 ５ 　 试验方法 ５ ． １ 　 受试物 受试物应使用原始样品 ， 若不能使用原始样品 ， 应按照受试物处理原则对受试物进行适当处理 。 ５ ． ２ 　 实验动物 ５ ． ２ ． １ 　 动物选择 常用健康年轻的成年大鼠或小鼠 ， 如使用小鼠 ， 可选择 ７ 周龄 ～ １２ 周龄 ， 试验开始时动物体重的差异不应超过平均体重的 ２０％ 。 动物应随机分组 ， 每组雌性和雄性动物至少各 ５ 只 。 如果试验设有几个采样时间点 ， 则要求每组每个性别每个采样时间点都有 ５ 只能用于分析的动物 。 ５ ． ２ ． ２ 　 动物准备 试验前动物在实验动物房至少应进行 ３ｄ ～ ５ｄ 环境适应和检疫观察 。 ５ ． ２ ． ３ 　 动物饲养 实验动物饲养条件应符合 ＧＢ１４９２５ 、 饮用水应符合 ＧＢ５７４９ 、 饲料应符合 ＧＢ１４９２４ 的有关规定 。 试验期间动物自由饮水和摄食 ， 每笼动物数应满足实验动物最低需要的空间 ， 以不影响动物自由活动和观察动物的体征为宜 。