中华人民共和国城镇建设行业标准 生活垃圾渗沥水 总大肠菌群的检测 多管发酵法 Leachate-Detection for members of the coliform group-Multiple-tute fermentation method CJ/T3018.15—93 主题内容与适用范围 本标准规定了用多管发酵法检测渗沥水中总大肠菌群的方法。 本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。 2 引用标准 GB 5750生活饮用水标准检验法 总大肠菌群 GB4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定 3术语 总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氛的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸、 产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 总大肠菌群数系以每升渗沥水样品内，总大肠菌群的最可能数（MPN）表示。 原理 根据总大肠菌群具有的生物待征，如革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃于乳糖内培养能 发酵，并在24h内产酸、产气的待点，将不同稀释度的试样接种到具有选择性的乳糖培养 基中，经培养后根据阳性反应结果，测出原试样中总大肠菌群的MPN值。 5培养基和试剂 本标准所用试剂，除另有说明外，均为符合国家标准或行业标准的化学纯试剂和生化 试剂，均用蒸馏水或去离子水。 5.1乳糖蛋白陈培养液 5.1.1成份：蛋白陈 10g 中华人民共和国建设部1993-05-03批准 1993-09-01实施 54 CJ/T3018.15—93 牛肉膏 3g 乳糖 5g 氟化钠 5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL 蒸馏水 1000mL 5.1.2 将蛋白陈、牛肉膏、乳糖及氨化钠置于1000mL蒸馏水中加热溶解，调整pH为7.2~ 7.4，再加入1mL1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，置高压 蒸汽灭菌器中，以115℃灭菌20min，存于冷暗处备用。 5.2三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液 按上述乳糖蛋白陈培养液（5.1）浓缩三倍配制。 5.3品红亚硫酸钠培养基 5.3.1威份：蛋白陈 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 3.5g 琼脂 15~30g 蒸馏水 1000mL 无水亚硫酸钠 ~5g 5%碱性品红乙醇溶液 20mL .5.3.2储备培养基的制备 先将琼脂加至900mL蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白陈，混匀使其溶 解。再用蒸馏水补足到1000mL，调整pH为7.2~7.4，热用脱脂棉或绒布过滤，再加入 乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min，存于冷暗 处备用。 5.3.3平板培养基的配制 将上法制备的储备培养基（5.3.2）加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸 管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无 水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解后，置于沸水浴中煮沸10min 以灭菌。 用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡 粉红色为止。将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基内，并充分 混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固 后，倒置冰箱内备用。此种已制成的培养基于冰箱内保存应小于两星期，如培养基已由茨， 红色变成深红色，则不能再用。 5.4伊红美蓝培养基 5.4.1成份：蛋白陈 10g 乳糖 10g 55. CJ/T 3018.15-93 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000mL 2%伊红水溶液 20mL 0.5%美蓝水溶液 13mL 5.4.2储备培养基的制备 先将琼脂加至900mL蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白陈，混匀使之溶 解，再用蒸馏水补足到1000mL，调整pH为7.2～7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入 乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中以115℃灭菌20min，贮存于冷暗 处备用。 5.4.3平板培养基的配制 将上法制备的储备培养基（5.4.2）加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸 管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液，加 入已融化的储备琼脂内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基适量倾入于已 灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后，倒置冰箱内备用。 5.5生理盐水 将8.50~9.50g氯化钠（NaC1）溶于水中，稀释成1000mL，摇匀。pH值应为4.5~～ 7.0. 6 仪器、设备 6.1 高压蒸汽灭菌器。 干燥箱：最高工作温度300℃。 6.31 恒温塔养箱：36±1℃。 6.4 冰箱。 恒温水浴：46±1℃。 6.65 生物显微镜。 稀释瓶：125mL小口玻璃方瓶。 6.8 玻璃试管：18×180mm 玻璃倒管：3×30mm 6.10刻度吸管：1mL，10mL，分度至0.1mL。 6.11 载玻片。 6.12平皿：直径90mm。 6.13接种环：直径3mm。 6.14酒精灯。 7样品 供总大肠菌群检测的渗沥水实验室样品量约雷100mL，用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。 采样后应尽快检测，在2h内不能处理时，应置于2～5℃冷藏，最长保存时间为6h。 56