ICS 65.120 CCS B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T19423—2020 代替GB/T19423—2003 饲料中尼卡巴嗪的测定 Determination of nicarbazin in feeds 2021-07-01实施 2020-12-14发布 国家市场监督管理总局 发布 国家标准化管理委员会 GB/T 19423—2020 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T19423—2003《饲料中尼卡巴嗪的测定 高效液相色谱法》，与GB/T19423 2003相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下： —一增加了液相色谱-串联质谱测定方法（见第5章）； 更改了高效液相色谱法的检出限，增加了定量限（见第1章，2003年版的第1章）； 一更改了高效液相色谱法的提取和净化方法（见4.5.1、4.5.2，2003年版的7.1）； 更改了高效液相色谱法的试验数据处理（见4.6，2003年版的7.4）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 料检测所。 本文件主要起草人：王威利、丁晨红、张志健、赵贵、万凯、王旭、李亚菲、苏秋权、林雪贤、章厉劫、 侯轩、黄晓梅、殷秋妙、梁锐、崔泽锋、谢丽丽、王英。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： -GB/T19423—2003。 1 GB/T19423—2020 饲料中尼卡巴嗪的测定 1范围 本文件描述了饲料中尼卡巴嗪的高效液相色谱和液相色谱-串联质谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中尼卡巴嗪的测定 本文件高效液相色谱法中配合饲料、浓缩饲料的检出限为0.5mg/kg，定量限为1mg/kg，添加剂 预混合饲料的检出限为1mg/kg，定量限为2mg/kg；液相色谱-串联质谱法的检出限为0.02mg/kg，定 量限为0.05mg/kg。 2规范性引用文件 2 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文 本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4高效液相色谱法 4 4.1原理 检测，外标法定量。 4.2试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.2.1水：GB/T6682，级。 4.2.2乙睛：色谱纯。 4.2.3提取溶液：甲醇十乙=50十50。 4.2.480%乙睛溶液：准确量取80mL乙腈（4.2.2），加水定容至100mL，混匀。 4.2.5氢氧化钠溶液（0.2mol/L）：准确量取0.8g氢氧化钠，用水稀释并定容至100mL，混匀 4.2.64%甲酸乙腈溶液：准确量取4mL甲酸，用乙腈（4.2.2）稀释并定容至100mL，混匀。 4.2.7标准储备溶液（1000μg/mL）：称取尼卡巴嗪（Nicarbazin，CigHigN，O，CAS号：330-95-0，含量 （4.2.2)定容，摇匀，于一18℃以下保存，有效期为3个月 4.2.8标准中间溶液（100μg/mL）：准确量取标准储备溶液（4.2.7）1mL，置于10mL容量瓶中，用乙 1 GB/T19423—2020 睛（4.2.2）稀释至刻度，于一18℃以下保存，有效期为3个月。 4.2.9标准系列溶液：准确移取适量标准中间溶液（4.2.8）于10mL容量瓶中，用80%乙睛溶液 （4.2.4）稀释定容配成标准系列溶液，质量浓度分别为：0.04μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、 1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL,临用现配。 4.2.10MAX固相萃取小柱：60mg/3mL，或性能相当者。 4.2.11微孔滤膜：0.45μm，有机系。 4.3 仪器设备 4.3.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器/二极管阵列检测器 4.3.2 分析天平：感量0.001g和0.01mg。 4.3.3 涡漩混合器。 4.3.4 氮吹仪。 4.3.5 超声波清洗机。 4.3.6 冷冻离心机：转速不低于8000r/min。 4.3.7 固相萃取装置。 4.4样品 按GB/T20195制备试样，至少200g，粉碎使其全部通过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装人 磨口瓶中保存，备用。 4.5 试验步骤 4.5.1提取 平行做两份试验。称取试样2g（添加剂预混合饲料0.2g~1g，尼卡巴嗪含量小于10mg），精确至 0.001g，于50mL离心管中，准确加入25mL提取溶液（4.2.3），涡漩混匀1min，置于50℃水浴超声提 取20min，每隔5min充分振荡一次。于8000r/min离心5min。取上清液于50mL离心管中，残渣 用25mL提取溶液（4.2.3）重复提取一次，合并两次提取液，混匀。准确移取5mL提取液于15mL离 心管中，加人0.2mL氢氧化钠溶液（4.2.5），涡漩混匀后，得到试样待净化溶液，备用。 注：当添加剂预混合饲料中尼卡巴嗪含量大于1%时，建议适当减少称样量（试样中约相当于尼卡巴嗪含量10mg） 进行测定。 4.5.2净化 MAX固相萃取小柱（4.2.10)先用3mL提取溶液（4.2.3）预淋洗。将4.5.1得到的试样待净化溶液 全部过柱，抽干。用5mL4%甲酸乙睛溶液（4.2.6）洗脱，收集洗脱液，于50℃水浴中氮气吹至少于 2mL，用80%乙睛溶液（4.2.4）定容至5mL，涡漩混勾后过0.45um微孔滤膜，得到试样溶液，用高效 液相色谱仪测定。 4.5.3测定 4.5.3.1高效液相色谱参考条件 色谱柱：Ci柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5.0μm；或性能相当者。 流动相：乙腈十水=50十50。 流速：1.0mL/min。 柱温：30℃。 2