ICS 65.140 B 47 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 32947—2016 蜂蜡中二十八烷醇、三干烷醇的测定 气相色谱法 Determination of octacosanol and triacontanol contents in beeswax- Gas chromatography 2016-08-29发布 2017-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32947—2016 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华全国供销合作总社提出。 本标准由全国蜂产品标准化工作组归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蜜蜂研究所、农业部蜂产品质量监督检验测试中心（北京）、中国 养蜂学会。 本标准主要起草人：李熠、薛晓锋、黄京平、吴杰、吴黎明、赵静、张金振、周金慧、陈芳、干鹏、陈兰珍 I GB/T32947—2016 蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇的测定 气相色谱法 1范围 本标准规定了蜂蜡中二十八烷醇、三十烷醇含量的测定方法 本标准适用于蜂蜡中二十八烷醇、三十烧醇含量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经回流水解后，用三氯甲烷提取样品中的二十八烷醇、三十烷醇，提取液经无水硫酸钠干燥净 化，气相色谱火焰离子化检测器检测，外标法定量。 4试剂与材料 4.1 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的一级水。 4.2氢氧化钾。 4.3 无水硫酸钠。使用前650℃灼烧4h。 4.4 三氯甲烷。 4.595%乙醇。 4.60.5mol/L的氢氧化钾乙醇溶液；称取2.8g氢氧化钾，用100mL95%乙醇溶解于塑料瓶中，常温 密封保存。 4.7二十八烷醇、三十烷醇标准品：纯度≥98%。 4.8二十八烷醇、三十烷醇标准储备液：分别称取20mg二十八烷醇、三十烷醇标准品，精确至0.1mg 放人100mL容量瓶中，加三氯甲烷超声波溶解后定容。常温密封保存。 4.9二十八烷醇、三十烷醇标准工作溶液：准确吸取标准储备液0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、 10.00mL于10mL容量瓶，用三氯甲烷配制成10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L、 200.0mg/L的标准工作溶液。常温密封保存。 5仪器设备 5.1气相色谱仪：配有火焰离子化检测器（FID）。 5.2超低温冰箱。 5.3高速粉碎研磨仪。 1 GB/T32947—2016 5.4 分析天平：感量0.1mg和0.001g。 旋转蒸发仪。 5.5 回流装置。 5.7 超声波清洗器。 5.8 滤膜：有机系，0.45μm。 6 6试样制备与保存 6.1 试样的制备 取样品200g置于超低温冰箱中（一18℃），1h后取出，用粉碎机研磨成粉状，置于样品瓶中，密封 标记。 6.2 2试样的保存 将试样置于密封袋中，一18℃冷冻保存。 7测定步骤 7.1提取 称取均勾的试样0.25g，精确至0.001g，置于150mL锥形瓶中，加入20mL氢氧化钾溶液，水浴 90℃回流2h，60℃旋转蒸发去除乙醇后，加入50mL三氯甲烷溶解残渣，并将溶液全部转移至透明 玻璃离心管中，加人30mL水，漩涡振荡1min，静置，除去上层液体，再重复用30mL水清洗两次后， 将有机相转移至100mL容量瓶中，并用三氯甲烷定容。测定前，取10mL溶液用10g无水硫酸钠干 燥，用0.45μm微孔滤膜过滤，待气相色谱测定。 7.2 2气相色谱条件 气相色谱条件参考以下参数： a） 色谱柱：（5%-苯基）-甲基聚硅氧烷30mX0.25mm（内径）X0.25μm或相当者； b) 柱温：200℃保持1min，以5℃/min的速率升温到320℃，保持10min； c) 进样口温度：320℃； d) 检测器温度：340℃； e) 载气：氮气（N，），纯度≥99.99%； f) 燃气：氢气（H，），纯度≥99.99%； 柱流速：1.0mL/min； 8) h) 氢气流速：30mL/min； i) 空气流速：300mL/min； j) 不分流进样：2μL。 7.3 3气相色谱测定 取适量试样溶液和相应的标准工作溶液注人气相色谱仪分析，以其标准溶液峰的保留时间为定性 依据，以其色谱峰面积值定量测定样品中二十八烷醇、三十烷醇的含量。标准工作液及试样液中的响应 值均应在仪器检测的线性范围之内。标准溶液和试样溶液的气相色谱图参见附录A。 2